最近这段时间总有小伙伴问小编薄层色谱（薄层色谱法的分析方法）是什么，小编为此在网上搜寻了一些有关于薄层色谱（薄层色谱法的分析方法）的知识送给大家，希望能解答各位小伙伴的疑惑。

【资料图】

薄层色谱（薄层色谱法的分析方法）

一、定性分析

1.利用保留值定型 在特定的色谱系统中，化合物的R f值一定，比较未知物和标准物的R f值，能够作为鉴定未知物的依据。定性分析通过显色等方法定位后，测出斑点的R f值，与同块板上的已知对照品斑点的R f 值对比， R f值一致，即可初步定性该斑点与对照品为同一物质。然后更换几种展开系统，如R f值仍然一致，则可得到较为肯定的定性结论。这种定性方法适用于已知范围的未知物。由于R f值重现性差，进行定性困难，因此也常采用相对比移值RS来定性。

2.板上化学反应定性 主要有以下两种方式：①反应后生成特征颜色的化合物，借以鉴定反应物；②反应后生成复杂的、无法鉴定组分的混合物，但可根据生成物的“指纹”特征加以鉴定。除以上两种定性方法外，还有板上光谱定性、TLC与其他联用技术间接联用定性、薄层色谱-傅立叶变换红外光谱联用定性以及薄层色谱-质谱联用定性。将分离后的区带取下，洗脱后再用其他方法如紫外-可见分光光度法、红外分光光度法进行进一步定性。

二、定量分析

由于受诸多因素的影响，很难控制色谱条件的一致性。例如，点样量的精确度，展开后斑点面积的规则程度和测定方法的精确度等，致使薄层色谱法的定量分析处于“半定量”或进行限量检查阶段。色谱的定量使用薄层色谱扫描仪等仪器直接测定较为准确，也可在分离后将斑点进行洗脱，再用紫外-可见分光光度法、气相色谱法等仪器方法进行定量。

1. 目视比较法半定量 将不同量的对照品配成系列溶液和试样溶液定量地点在同一块薄层上展开，点样时要严格控制点样量，可使用微量点样器。显色后以目视法比较色斑的颜色深度和面积的大小，求出试样的近似含量。在严格控制操作条件下，色斑颜色和面积随溶质量的变化而变化。目视比较法分析的精密度为±10%。

2. 洗脱法进行定量 在薄层的点样线上，定量点上样品溶液，并在两边点上已知对照品作为定位标记。展开后，只显色两边的对照品。定位后，如为软板，可将薄板中间部位被测物质的区带用捕集器收集下来；如为硬板，可用工具将样品区带定量地取下，再以适当的溶剂洗脱后，用其他化学或仪器方法如重量法、分光光度法、荧光法等进行定量。在用洗脱法定量时，注意同时收集洗脱空白作为对照。 用于定量的薄层色谱，要求展开后的色斑集中，无拖尾现象。洗脱时，要选用对被测物有较大溶解度的溶剂浸泡，进行多次洗脱以达到定量洗脱目的。对一些吸附性较强而不易洗脱的组分，可以采用离心分离或过滤等方法定量洗脱。

3. 薄层扫描法 是指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值进行色谱定量的方法。薄层扫描仪是为了适应薄层色谱的要求而直接专门对斑点扫描的一种分光光度计，其中双波长薄层色谱扫描仪是常用的一种，其结构与双光束双波长分光光度计详式、原理也相同。下图是其光学系统结构简图。

双光束双波长薄层扫描仪

L-光源；MC-单色器；CH-斩光器；P-薄层板；PM-光电检测器

从光源L（氘灯、钨灯或氙灯）发出的光，经单色器MC（由光栅和狭缝组成）分成两束不同波长的光λ1和λ2。斩光器CH交替遮断这两束光，最后合在同一光路上，通过狭缝照到薄层板P上。若反射测定时，光束照射到薄层板上斑点以前的光，一部分被石英窗板反射由监测光电管接受，另一部分照射到斑点，除部分光被样品吸收外，其散射光为反射用光电管所接受，两检测器输出信号之比经对数转换器转换后作为吸收度信号；若透射测定时，由透射光电管代替反射光电管，它的输出信号与监测光电倍增管的输出信号之比，经对数转换后得到透射测定的吸收度信号。此信号经仪器处理就可以得到轮廓线或峰面积。

两种波长的选择，可先对欲测斑点进行原位光谱扫描，根据斑点的吸收曲线选择其最大吸收峰波长作为测定波长λS；选择斑点吸收光谱的基线部分即为该化合物无吸收的波长为参比波长λR，如下图所示。

斑点的吸收光谱

λS为测定波长；λR为参比波长

用双波长扫描由于λS扫描所得测定值中减去了λR扫描测定值（斑点所在位置的空白薄层吸收值），薄层背景不均匀性得到了补偿，扫描曲线的基线较为平稳，测定精度得到改善，下图中显示了用λS475 nm和λR678 npH单波长扫描及λS、λR双波长扫描一些胡萝卜色素类化合物所得到的扫描曲线，由图可见，双波长扫描能显著改善基线的平稳。

单波长扫描和双波长扫描的比较

①双波长扫描曲线；②，③为单波长扫描曲线

关键词： 薄层色谱 薄层色谱法的分析方法